Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次浮现去甲自身免疫球抗原到浮现1DF肾病诊疗疼痛的实质性率在老年人时期就有很好的描述，多个去甲自身免疫球抗原白血病的老年人中都有70%在小鼠转换后10年内患上肾病，而随访15年的老年人这一比率增加到84%。相比之下，九成诊疗1DF肾病一半以上的DF1DF肾病的胃癌机制还无法受益格外进一步的研究者。

越来越多的人开始适用依此系统来定义1DF肾病的实质性：生殖在浮现多种去甲自身免疫球抗原时转回第1收尾，浮现血糖异常时转回第2收尾，浮现疼痛时转回第3收尾。一些多发去甲自身免疫球抗原白血病的生殖，在1期和2期，实质性很很慢，并发展为胃癌的1DF肾病。我们以前描述了一第一组在首次检测到多种去甲自身免疫球抗原样品后至少10年无肾病的极很慢实质性者，这第一组病症人数少，但特征非常恰当。随后，我们辨认出去甲自身抗体酪氨酸CD8+T细胞膜中间体在实质性很很慢的病症中都理论上不存在，但在近期胃癌和肇因的肾病病症中都很容易检测到。这可能证明，与实质性病症相比，这些病症自身免疫中间体的缓冲增强。

格外早研究者证明，尽管缓冲性T细胞膜(Treg)数量正常，但肾病病症存在一些功能缺陷，其中都包括对IL-2的中间体战斗能力提高。此外，肾病病症中都的不稳定性CD4+T细胞膜可能对缓冲格外具抵抗性，观感为不稳定性T细胞膜的诱发减弱，自然诱发的Treg和体内诱发的正向Treg，以及抗体境况的CD4+T细胞膜中都IL-2中间体减弱。本研究者的目的是描述了CD4+缓冲性T细胞膜(Treg)在一小群极很很慢实质性者中都的特征，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以年轻人为基础的横向研究者，在21岁以下胃癌的病症亲属中都检查1DF肾病的凶险因素。我们以前描述了一直很很慢实质性者的特征，他们始终保持多重去甲自身免疫球抗原白血病超过10年，但无法浮现肾病的诊疗疼痛，很慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名暂时始终保持无肾病并愿意缺少大量肠道样品的很很慢实质性者纳入T和B细胞膜功能深入研究。在目前的研究者中都，8名很慢实质性者(SP第一组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的去甲自身免疫球抗原白血病。所有的参与者都位处1DF肾病实质性的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身免疫球抗原对某些抗体的白血病中间体，然而，一名病症不太可能位处2期至少6年，但无法浮现诊疗疼痛，一名病症被病症为肾病，该受试者72岁，在捕获科学研究样品时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究中都对该遗传物质来进行了单独风险评估。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，运用于多参数流式细胞膜拳法和T细胞膜诱发试验风险评估遗传物质中都Treg的阈值、表DF和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重生)来进行无监督聚类深入研究，风险评估Treg表DF。

结果：与健康遗传物质相比，来自很慢实质性体的心灵CD4+T细胞膜的监督聚类辨识，触发的心灵CD4+ Treg阈值增加，与糖皮质激素正向的TNFR相关抗原(GITR)指出增加有关。一名HbA1c下降时的病症与实质性很很慢者和给定的印证第一组相比，Treg谱有所不同。功能深入研究证明，与健康遗传物质相比，来自很很慢实质性体的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞膜诱发明显受损。观感为对不稳定性CD4+T细胞膜CD25和CD134指出的诱发增加。

上图1 深入的表DF深入研究辨识，CD4+Treg亚DF在很慢实质性数据流中都增加。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标识物指出鉴定出10个元簇:心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)适用9个不同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个节点象征性一个集群(100个集群)，格外大的元集群(10个元集群)在节点第一组外面上色。每个节点中都的饼上图指出单个标识的指出高至。(b)每个元聚类的热上图，以辨识整体标识指出。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)填充上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下金属量为每个metacluster箱本站上图(金属量> 0.05%)确定为HD和SP第一组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞膜(l)。深蓝色左上方象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 适用CITRUS的预测模DF声称，Treg阈值的增加是实质性很很慢的标志。分级门控(a - f)和水果深入研究(g-k)比较SP参与者和给定的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的相似之处。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的象征性性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR指出来进行分离，三维FlowSOM族群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及遗传物质SP 606(深蓝色)中都CD25+ cd127的阈值汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱本站上图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)经济作物簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3指出强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD数据流二者之间的不同。(j)箱本站上图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组中都，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相比之下金属量(比率)。(k)直方上图辨识每个簇的表DF(深蓝色)和Treg标识相比之下指出与取材指出(蓝色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。取材与所有其他簇中都标识的指出有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证

上图3 与健康献血者相比，实质性很很慢者心灵treg的GITR增加。每个心灵CD4+T细胞膜元簇(心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个指出标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的指出热上图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR指出串联，辨识直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和验证，p< 0.07(深蓝色)所有遗传物质包括，p< 0.05(蓝色)遗传物质SP 606和给定的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR指出，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，辨识直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验证

上图4 来自很很慢实质性的CD4+ treg细胞膜控制不稳定性CD4+T细胞膜的战斗能力提高。SP第一组用蓝色的本站和左上方指出，HD第一组用紫色的本站和左上方指出，深蓝色的本站/左上方指出遗传物质sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标识为CFSE, Treg按注意到的比率滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞膜，培训3天后来进行流式细胞膜拳法检测。(a-d)与CD4+；也者相比之下应该的treg培训(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发比率。适用白血病印证(触发的响应该细胞膜不含treg)计算诱发比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 不稳定性CD4+T细胞膜对很很慢实质性的T细胞膜活化的诱发格外敏感。SP第一组用蓝色的本站和左上方指出，HD第一组用紫色的本站和左上方指出，深蓝色的本站/左上方指出遗传物质sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标识，treg按注意到的比率滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞膜，培训3天后来进行流式细胞膜拳法(CD25反染)和细胞膜因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者联合培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发百分率(b)。(c,d) CD25诱发百分率(c)和CD134诱发百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中都的指出。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们推断的论点是，来自很很慢实质性子的活化心灵CD4+Treg在GITR指出中都受益了扩展和丰富，凸显了进一步研究者Treg在1DF肾病风险生殖中都的关联性的必要性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28